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致畸试验

作者:主编 时间:2023年02月15日 阅读:1015 评论:0

在动物胚胎发育过程中,有些外来化合物可使其细胞分化和器官形成受到干扰,以致后代胎儿出现形态结构异常,此种作用称为致畸作用。具有致畸作用的物质,称为致畸物。致畸作用是外来化合物毒性作用的一种表现。检查外来化合物是否能通过母体引起胎儿出现畸形的试验称为致畸试验。

(1)试验方法: 基本原理是使受孕动物在胚胎器官形成期中摄入受试物,并于分娩后观察胎仔畸形情况。试验动物可用受孕大鼠、小鼠或家兔。由于大鼠自然畸形发生较少,体形大小适于检查,故较多用。试验开始前,先将性发育成熟的雌性动物按二雌一雄比例交配。受孕后,将孕鼠随机分组。确认是否受孕的方法可进行阴道涂片,检查是否有精子出现;也可检查是否有阴栓。阴栓为雌鼠阴道分泌物与雄鼠精液和前列腺分泌物的混合物,呈白色蜡块状;动物交配后可于雌鼠阴道外部出现,但较易脱落。

一般可以亚慢性毒性试验中的最大无作用剂量为高剂量组,以其1/3左右为低剂量组。也可以1/3~1/2LD50为高剂量组,1/50~1/30LD50为低剂量组。受试物给予时间,必须于胚胎发育过程中的器官形成期,此时胚胎对致畸物最敏感。受试物给予时间极为重要,如给予过早,可影响受精卵着床过程;过迟,则胚胎已发育成熟,不能呈现明显致畸作用。一般可于受精卵着床后开始给予,如大鼠为受孕后第7~8d,并可持续给予至受孕后第16~18d。大鼠着床期为雌鼠受精后第5~6d,小鼠为第4~5d,家兔为第7~8d。

(2) 结果检查和评定: 动物自然分娩前1~2d,剖腹取出子宫内胎仔,大鼠妊娠期为21d,小鼠19d,家兔30~35d。先检查各种外观畸形,如露脑、小头、小耳、单鼻孔、小眼、无眼、腭裂、唇裂、少趾、多趾、短肢、短尾、无尾等肉眼可见的畸形。后将2/3的胎仔于鲍音(Bouin)溶液中固定2周,检查内脏。其余1/3于75~90%乙醇中固定,经茜素红染色后,进行骨胳检查。鲍音溶液系由苦味酸饱和溶液75ml,浓甲醛溶液25ml和冰醋酸3ml,混合而成。

根据畸胎和各种畸形出现数目及活产胎仔总数计算畸胎发生率。凡一个胎仔出现一种或一种以上畸形均作为一个畸胎计算。另外,可根据各组动物胎仔中出现畸形次数,计算畸形总数。一个胎仔出现二种畸形,即作为二次畸形。评定结果时可将各试验组畸胎发生率和畸形总数与对照组比较。

致畸作用存在明显种属差异,对动物致畸物质不一定对人也致畸。但在食品毒理学中致畸作用是外来化合物毒性作用的一种表现。为了确保人类健康,在一定剂量下对动物具有致畸作用的食品添加剂应禁止使用; 如为食品污染物也应设法由食品中排除或尽量减少。

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文章来源:主编

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